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沛歐定氮儀怎樣測定花生粕和豆粕中的粗蛋白含量?

更新時間:2017-12-12  |  點擊率:2278

花生粕是從經壓榨提煉油料后的產品,而花生粕的營養價值較高, 其代謝能是粕類飼料中zui高的, 粗蛋白質含量接近大豆粕,高達達48%以上。

可使用沛歐凱氏定氮儀SKD-100及紅外石英消化爐SKD-08S2來測定其粗蛋白含量,若蛋白質的含氮量已知時,則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。)

當蛋白質與濃硫酸共熱時,其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水,而氮則轉變成氨,并進一步與硫酸作用天生硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是,這個反應進行得比較緩慢,通常需要加進硫酸鉀或硫酸鈉以進步反應液的沸點,并加進硫酸銅作為催化劑,以促進反應的進行。消化完成后,在凱氏定氮儀中加進濃堿,可使消化液中的硫酸銨分解,游離出氨,借助水蒸汽蒸餾法,將產生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨與溶液中氫離子結合,使溶液中的氫離子濃度降低,指示劑顏色改變,然后用標準無機鹽酸滴定,直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。蛋白質的含氮量為16%,即1克蛋白質中的氮相當于6.25克蛋白質,用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。 

1 實驗材料 

1.1 器材    

SKD-100凱氏定氮儀 、SKD-08S2紅外石英消化爐(消化爐可以任意選擇消化孔數,而不影響熱量散失)1.2 試劑
實驗材料
器材
300ml凱氏燒瓶 4個; 
移液管;錐形瓶; 
試管; 
小玻璃珠 
試劑 
98%濃硫酸分析純; 
35%氫氧化鈉溶液;
2%硼酸溶液; 
標準鹽酸溶液(0.01mol/L)。 
粉末硫酸鉀-硫酸銅混合物 :K2SO4CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。 
混合指示劑(田氏指示劑):由50ml 0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml 0.1%甲基紅乙醇溶液混合配成,貯于棕色瓶中備用。 
樣品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。 
2.實驗步驟
安裝凱氏定氮儀。 

  

消化:取4個300ml凱氏燒瓶并標號,各加1顆玻璃珠,在1號及2號瓶中各加樣品1ml,催化劑(K2SO4CuSO4·5H2O)200 mg,濃硫酸5 ml。留意加樣品時應直接送進瓶底,而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1 ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸,作為對照。在透風櫥內進行消化。在消化開始時應控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當加強火力,繼續消化,直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力,冷卻至室溫。 (上海沛歐SKD-08S2消化爐可編程設定消化爐消化樣品的升溫曲線)

蒸餾: 蒸餾器的洗滌:用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀,在蒸汽發生器中加進用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑,用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后,在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶,繼續蒸汽洗滌2分鐘,觀察錐形瓶內的溶液是否變色,如不變色則證實蒸餾裝置內部已洗滌干凈。移走錐形瓶,停止加熱,打開夾子。 (沛歐skd-100可以設定清洗程序)
蒸餾:設定取30%的氫氧化鈉溶液10ml,向玻璃杯中加進蒸餾水約5ml稀釋液,設定蒸餾時間5分鐘,開始蒸餾。氨氣進進錐形瓶,瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續下一個蒸餾操縱。待樣品和對照均蒸餾完畢后,同時進行滴定。 
滴定:用0.01mol/L的標準鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量,硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點。 
結果計算: 
其中:
A為滴定樣品用往的鹽酸溶液均勻ml數;
B為滴定對照液用往的鹽酸溶液均勻ml數;
C為所取樣品溶液的ml數

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